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UMR 7286 - Centre de Recherche en Neurobiologie et Neurophysiologie de Marseille

Proteomique CAPM

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ANALYSE DES INTERACTIONS MOLECULAIRES PAR SPR

Etude des interactions moléculaires par la technologie SPR (Surface Plasmon Resonance)

Les systèmes SPR sont conçus pour visualiser en temps réel des interactions entre biomolécules non marquées. Pour cela, un des réactifs, le ligand, est retenu sur la sensor chip et les autres partenaires de l’interaction, appelés analytes, sont injectés à un débit constant à l’aide d’un circuit microfluidique. Le principe de la SPR permet de suivre à tout moment les changements de masse à la surface de la sensor chip, induits par la formation puis la dissociation des complexes moléculaires. L’intensité du signal mesuré dépend à la fois du nombre de ligands immobilisés sur la sensor chip et de la masse des analytes injectés. Pour une quantité fixe de ligand immobilisé, la sensibilité de détection sera d’autant plus élevée que l’analyte a une masse importante. Inversement, il est possible de détecter l’interaction de petits partenaires seulement si une densité suffisante de ligands (nombre de sites récepteurs élevé) est immobilisée. C’est l’exploitation de la mesure en temps réel qui va permettre d’obtenir une cinétique de l’interaction donnant accès aux paramètres dynamiques (constantes cinétiques d’association et de dissociation) et d’en déduire l’affinité.

Avantages de la technologie SPR :

  • études qualitatives et quantitatives sans marquage de l’un des partenaires,
  • Sensibilité élevée (détection de l’interaction à partir d’environ 1 pg de protéine), et faibles quantités de matériel biologique requis (quelques dizaines de microgrammes),
  • enregistrement de l’interaction s’effectue en quelques minutes en temps réel
  • large gamme d’affinité (KD compris entre 10-3 et 10-12 M),
  • biomolécules de nature très variées (ADN, ARN, peptides, protéines, lipides, membranes biologiques natives, molécules pharmacologiques).

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